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凍幹保存人紅細胞的技術要點
更新時間:2022-06-02 點擊次數:1030

凍幹穩定劑的選擇 

為了減少細胞損傷,在凍幹液和再水化洗滌液中需要加入穩定劑(凍幹緩衝液、洗滌液中的大分子聚合物和碳水化合物),紅細胞凍幹穩定劑文獻報道各異,主要包括:


1、大分子聚合物,如PVP、葡聚糖、骨膠等;

2、聚陰離子化合物,如焦磷酸、磷酸化肌醇;

3、碳水化合物,如葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖等;

4、磷酸鹽緩衝液或鉀、鈉等金屬離子。


其中大分子聚合物和聚陰離子化合物的選擇及其分子量和在溶液中的濃度等因素,對細胞的回收率均有影響。進一步的研究證明,PVP的玻璃化轉變溫度受分子量和濃度的製約,即玻璃化轉變溫度隨分子的增大而提高,隨著水分的丟失(或在凍幹體係中濃度的增加)而提高,凍幹和保存生物樣品應在保護劑的玻璃化轉變溫度下進行,以減少生物活性的丟失。


再水化過程中使細胞膜不受損傷 為了細胞的存活,凍幹過程中細胞必須處於高滲狀態,所用保養液的滲透壓相當於3~5倍生理滲透壓,在給人體輸注前需要經過逐步洗滌。將細胞懸液的滲透壓調整到生理水平的過程中,容易出現細胞膜破裂,血紅蛋白流出的現象。


凍幹過程中的溫度控製 

紅細胞的凍幹首先使細胞冰凍,由液態變成固態,然後使箱體內的細胞在抽氣減壓、升溫的同時,水分升華,逐步達到幹燥的目的。因此,冰凍、升溫與真空度三者關係如何協調、控製,對凍幹效果至關重要。

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